悬浮细胞如何进行传代培养？

悬浮细胞传代是一项重要的实验操作,它可以帮助研究人员扩增和维持细胞株。悬浮细胞如何进行传代呢？

一、悬浮细胞的传代

悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮，因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞的损伤也较小。悬浮生长细胞的传代培养要比贴壁细胞简单得多，通常有两种方法。

1. 直接给带传代的培养瓶中补充一定量的新鲜.培养基，然后将进行分装。

2. 先通过离心弃掉营养匮乏的旧培养基，然后再用适量的新鲜培养基重悬细胞沉淀，最后将其分装至培养瓶中即可。

悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。

二、所需材料

★ 装有悬浮细胞的培养容器

★ 完quan生长培养基，预热至37%

★ 37°培养箱，充有二氧化碳浓度为5%的湿化空气

三、悬浮细胞传代流程

所有与细胞接触的溶液和设备均应为无菌状态必须采用正确的无菌技术，并且在超净台内进行。传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行。达到汇合状态时，悬浮培养的细胞会聚集成团块，转动培养瓶时培养基会变得浑浊。传代前所建议的最大细胞密度随细胞系不同而有所差异;详细信息请参阅针对具体细胞的立品说明书或操作手册。

四、悬浮细胞的传代方法

1、直接传代法

①待悬浮细胞长满至80%-90%左右 (细胞悬液变黄)，即可传代；

②用吸管吸弃细胞悬液1/2~ 2/3 ；

③加入适量的新鲜培养基，继续培养。

2、离心传代法

①将细胞悬液转移到离心管内；

②150g离心5min，弃上清；

③使用新鲜的培养基重悬细胞;

④吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。

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